甲烷单加氧酶调节蛋白MMOB的结...

调节蛋白B的分子量大约是16kDa,由7条β链构成两个β带，这2个β 带成直角，通过3个a螺旋，互相垂直交联在一起，邻接部分呈现螺旋趋势，但较混乱。N端易受蛋白影响发生水解，N端水解后缩短了MMOB的链长度。基因重组的MMOB与天然MMOB相比，和MMOH结合的亲和性有所降低。甲烷羟基化反应的效率，取决于MMOH和MMOB在催化过程中的相互作用动力学。整个蛋白质表面呈现疏水性，在酶系统反应中只对MMOH一些关键部位的结构和功能起调节作用，没有直接参与酶的催化反应。Walters等[42]利用NMR

甲烷单加氧酶的谱学表征

MMOH 结构的谱学表征：一系列谱学研究表明，MMOH双核铁中心含有一个μ-氢氧桥(pr-hydr-oxo)结构，容易发生诱导变形，在反应循环过程中受其它组分影响，可以随外部环境的变化而改变。联合使用多种谱学手段对MMOH的结构变化进行表征，有助于阐明MMO的反应机理。根据文献报道，在结构化学中常用的各种现代光谱和波谱技术，都可以用来研究MMOH双铁核中心的构型变化。它们包括ESR (electron spin resonace, 顺磁共振)，Mossbauer, EXAFS(ex-tended

甲烷MMOH双铁核中心构型

甲烷和分子氧的活化机理：为了阐明MMO可能的反应机理，Rosenzweig 等对Bath菌的MMOH晶体分别在4C、- 160C进行XFA表征。证明在一160°C时，双核铁中心由4个谷氨酸、2个组氨酸、1个乙酸基配位，但在4C时，乙酸配基则被水分子取代。因此在4C和一160C情况下，活性中心的构型是不同的，如图3-3所示。Shu等研究了OB3b的MMOH晶体活性中心结构，得出了同样的结果。

甲烷 羟基化酶的晶体结构

为详细了解甲烷单加氧酶的空间结构信息，1993年，Lippard领导的科研小组首先在Nature上报道了M.capsulatusBath菌的羟基化酶晶体结构，在学术界引起极大兴趣。 羟基化酶经过纯化以后，他们对缓冲液、盐浓度沉淀剂、温度、pH、蛋白质浓度等结晶参数进行了1000 多次筛选，首次用真空扩散法获得了Bath菌的MMOH晶体，并进行了X光单晶街射分析。

甲烷单加氧酶的总体构型

甲烷单加氧酶( methane monooxygenases, EC1.14. 13.25)的分子量约301kDa,研究比较深入的是可溶性甲烷单加氧酶sMMO,它包含三个组分:羟基化酶(sMMOH, 220~ 250kDa)、还原酶(sMMOR, 38~ 41kDa)和调节蛋白B (sMMOB, 15~ 18kDa). sMMOH是由三个亚基组成的二聚体(aβr)2,每个单体有一个双核铁活性中心，位于羟基化酶的a亚基上，a亚基既含有a螺旋也含有β折叠，也是sMMO中唯一存在β折叠的亚基，活性中心的

什么是甲烷单加氧酶的结构与反应化...

单加氧酶泛指在结构、生物化学和生物进化上完全不同的一系列酶，这些酶能够催化O2与不同的有机、无机底物发生反应，在原核、真核微生物的分解代谢、消除环境污染物中发挥着重要作用。

甲烷单加氧酶中组分D-orfY的...

在第一个甲烷单加氧酶的基因序列测定中，就发现在整个基因序列申有一个小的开放阅读框，编码为orfY,但迄今尚未从甲烷氧化细菌中分离出该蛋白，对它的功能也不清楚。该基因位于mmoZ与mmoC之间，分子量约12kDa，称为MMOD,如图2-2所示。Merkx 对这个位于mmoZ与mmoC之间，功能未知的片断orfY,在E.coli 中进行了克隆表达，获得了纯的MMOD蛋白，通过WestenBolt分析，在Bath中确有MMOD存在。一个可能的解释是该蛋白组装在MMO双铁核中心内，其功能是通过MMOD与MM

甲烷氧化菌的生物芯片研究

生物芯片可以用于细胞的检测和微生物菌群结构的高效分析。该技术是公认的，迄今为止最简便、快速、准确的分子生物学方法。

甲烷单加氧酶的克隆与表达

在1994年和1996年，美国Jahng和Wood发表了以OB3b菌为背景的基因工程菌降解三氯乙烯和氯仿的研究结果，当时由于构建的基因工程菌活性极低，所以他们认为该基因工程菌可能没有活性。2002 年，Wood在Microbiol. Comm.上又发表文章指出，1994年和1996年发表的那两篇论文，对基因工程菌活性的判断可能有误。他们认为，第一个以菌株OB3b为背景构建的Psudomonas Putida F1是有活性的，因为对TCE(三氯乙烯)的降解活性为5nmol/(min.mg)。而在19

甲烷单加氧酶的Cu离子调节表达

在细胞中，依据生长环境中可利用的CuP+浓度不同，甲烧单加氧酶有两种不同表达形式。Cu2+浓度较高时，颗粒性甲烷单加氧酶得到表达。