若羧酸的酰肼用碱金屬氫氧化物皂化，其反应混合物再用醋酸酸化时，所产生的肼可加以过量的对－二甲胺基苯（甲）醛来作出检定。按照肼的存在量，将有橙至黄色出現。如将酰肼的中性或弱酸性溶液直接和醛的酸溶液加热，也会发生同样的反应。显然酰肼被酸类部分皂化，而肼則和醛反应，经常地从快速建立的水解平衡中移去。这个显色反应中，醛和肼縮合试验中，方程式（1）中所形成的醛連氮（Ⅱ），立即在酸中溶解而产生醌型阳离子（Ⅲ）：
如将这个不发萤光的橙色或黄色溶液一滴放在滤紙上，則（Ⅲ）的形成，可以作出高度灵敏性的檢定。所留下的紅色到粉紅色斑点，是会在紫外光下发出深紅到鮭色螢光的。这个效应，可在很稀而几乎无色的溶液中看到；可能是由于（Ⅲ）和滤紙形成能发螢光的被吸附物，而按照（Ⅲ）的結构，应考虑到交換及加成两种吸附作用。滤紙上紅色到鮭色的萤光斑点，用氨处理会变为藍-绿色；但经酸类作用，即会恢复紅色螢光。这种可随意重复的螢光颜色变化，肯定是由于被吸附的（Ⅲ）和被吸附的（Ⅱ）互相轉变。
芳族胺类也可和对－二甲胺基苯（甲）醛縮合形成黃到橙色的希夫氏碱类。这种希夫氏碱类的很濃溶液，在滤紙上会留下发绿色螢光的斑点，这些斑点浸于氨液酒精后即消逝，再加酸化亦不能恢复。但是希夫氏碱（Ⅱ）的藍-绿色螢光斑点却会留在滤紙上，而滴以酸后，紅色螢光又可恢复，因此，这就有可能在纵有芳族胺盐存在之下，对酰肼类作出检定了。
下面的試驗法需要用过量的对－二甲胺基苯（甲）醛。所規定的試剂量，对于检定酰肼含量不超过1％的試液，已是有足够的过量。若含量較濃，則醛将和未皂化的酰肼在其自由－NH2基团上縮合。这个縮合作用将产生一种发黃色螢光的产物。
操作手续 将試液一滴在微量試管中用醛的酸性溶液一滴处理，而将混合物放水浴中温热5～10分钟。冷却的溶液，加水一滴后，取出一滴置于滤紙上。将紙浸于1：250的盐酸后，放在紫外光下观察。紅至鲑色的螢光表明一种酰肼存在。再浸于1：10氨时，斑点即变为藍-绿色。
試剂：对－二甲胺基苯（甲）醛0．4克溶于20毫升酒精加2毫升浓盐酸。
下列的物量，可被检出：
| 0.5微克 氨基脲 | 0.1微克 对－硝基苯（甲）酰肼 | 0.1微克 間－吡啶羧酰肼（烟酰肼） |
| 0.05微克 苯酰肼 | 0.25微克 邻－吡啶羧酰肼（皮考啉酰肼） | 0.05微克 对－吡啶羧酰肼（异烟酰肼） |
环状3－氨基酞酰肼（“魯米諾”）没有反应。
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