SCDLP培养基原理及现象
一、用途及原理
此培养基主要用化妆品检验时的样品制备,前增菌培养。
酪蛋白胨、大豆胨提供细菌生长所需的碳源、碳源及维生素,少量的葡萄糖可提供碳源促进细菌的快速生长,磷酸氢二钾为缓冲剂,可缓冲细菌分解葡萄糖产生的酸,维持p的相对稳定,氯化钠维持渗透压,卵磷脂和吐温80为中和剂,可中和化妆品中添加的防腐剂的抑菌效果,同时吐温80为表面活性剂,可帮助乳化化妆品中的油性成分在培养基中溶解均匀。
二、培养基配方(g/L)
酪蛋白胨 |
17.0 |
大豆胨 |
3.0 |
葡萄糖 |
2.5 |
磷酸氢二钾 |
2.5 |
氯化钠 |
5.0 |
卵磷脂 |
1.0 |
吐温 |
7.0 |
PH |
7.2士0.1 |
三、配制方法
称取本品31. 0g,另取吐温-80 7. 0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装, 121C高压灭菌15 分钟。备用。
配制说明:培养基中的卵磷脂不溶于水,因此冷水溶解后的培养基呈浑浊状态,加入吐温80加热溶解后可使卵磷脂溶解均匀,但吐温80在温度较高的条件下也呈浑浊状态,因此刚灭菌结束的培养基也呈浑浊状态,冷却后培养基会逐渐变澄清。
四、生长现象及结果观察
接种以下质控菌株,在36士1C下培养18- -24小时:
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量/CFU |
生长现象 |
鼠伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
10-100 |
浑浊 |
金黄色葡萄球菌 |
ATCC6538 |
10-100 |
浑浊 |
大肠埃希氏菌 |
AT0C25922 |
10-100 |
浑浊 |
铜绿假单胞菌 |
ATCC27853 |
10-100 |
浑浊 |
生产方法(同行参考配制)
1.准备溶液
在容器中加入一部分所需量的水,按照培养基的配方称取各种原料,依次加入使其溶解,后补足所需的水。蛋白胨、肉酱等物质需要加热溶解,加热时蒸发的水分在所有原料溶解后再加水。
准备固体培养基时,先将准备好的SCDLP液体培养基煮沸,然后加入称好的琼脂,继续加热至完全融化。继续搅拌,避免烧坏琼脂糊底部。
2.调节酸碱度
用pH试纸(或pH电位计或氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值。如果不符合要求,可以用10%盐酸或10%氢氧化钠调节,直到配方要求的酸碱度调节完。
3.过滤
趁热用滤纸、纱布或棉花过滤准备好的培养基。用纱布过滤时,好折叠成六层。用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱柱状,铺在漏斗上过滤。
4.包装
过滤后的SCDLP液体培养基应分开包装。如果要制作倾斜培养基,需要将培养基分成试管。如果要制作平板培养基或液体或半固体培养基,培养基应装在锥形瓶中。
包装时,一只手松开弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几个试管或锥形瓶,依次拿起培养基。包装时注意不要使培养基粘附在管口或瓶口,以免浸泡棉条造成杂菌污染。
装入试管的培养基量取决于试管和锥形瓶的大小和需要。一般制作斜面培养基时,每根15150 mm试管装3 ~ 4 ml左右(1/4 ~ 1/3管高),如果制作深层培养基,每根20220 mm试管装12 ~ 15 ml左右。每个锥形瓶中填充的介质通常是其体积的一半。
5.添加棉塞
分装后,需要用棉塞塞住管口或瓶口。棉塞的主要用途是过滤空气,避免污染。棉塞应使用普通的新鲜干棉,不能使用脱脂棉,以免脱脂棉吸水而不使用棉塞。
制作棉塞时,根据棉塞的大小将棉花铺成合适的厚度,抓一片手掌,铺在左手拇指和食指形成的圆孔中,右手食指插入棉塞中间,同时左手食指和拇指稍握,就会形成一个长条状的棉塞。
棉塞制作完成后,应迅速插入管口或瓶口,棉塞应紧贴内壁,不留缝隙,防止空气中的微生物沿褶皱侵入。棉塞不应太紧或太松。卫生棉条堵塞后,便携式卫生棉条、管子和瓶子不要掉落是合适的。棉塞的三分之二应该在管子或瓶子里,上端露出一点棉花便于拔出。试管和塞有棉塞的圆锥形瓶子应盖上厚纸,用绳子捆绑消毒。
6.制作斜面培养基和平板培养基。
培养基灭菌后,如斜面培养基和平板培养基,应在培养基固化前进行。
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