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凝胶色谱法中凝胶的类型


实验室k / 2019-07-27

       在凝胶色谱中,凝胶网状结构的孔隙大小及构成网状结构的物质的性质对分离效果起着决定性的作用。理想的凝胶应具有下述的条件:①凝胶必须在化学性质和物理性质上稳定;②有可控制的网状结构孔径;③颗粒呈球状,其大小有最小范围;④机械强度尽可能高,不易破碎。

       1.葡聚糖凝胶    是最常用的凝胶,由葡聚糖和甘油基(交联剂)通过醚桥(—O—CH—CHOH—CH2—O—)相交联而成的多孔性的网状结构。其化学结构如下(图14-13)。
       控制交联剂和葡聚糖的量,可以得到不同程度的交联度和多孔性。而许多留的羟基使凝胶在水中和其他高极性溶剂(如乙二醇、甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲亚砜等)中吸液膨胀。交联度大的孔径小,吸液少,膨胀也少,用于分离小分子量物质;反之,交联度小的孔径大,吸液膨胀程度也大,适用于分离大分子量物质。交联度可用“吸水量”或“膨胀重量”表示,即用每克干凝胶所吸收的水分重量来比较。商品凝胶的型号,多用“吸水量”的10倍数字来表示,例如,每克干凝胶吸水量为2.5g时,即定为G-25型。
       表14-9列出各种型号的葡聚糖凝胶的适用范围及有关性能。
表14-9  葡聚糖凝胶(G)类

分离范围(分子量) 分离范围(分子量)

浸泡时间(h) 浸泡时间(h)
型号 蛋白质 多糖 吸水量(g/g干凝胶) 膨胀体积(ml/g干凝胶) 20~25℃ 0~100

G-10

G-15

G-25

G-50

G-75

G-100

G-150

G-200

<700

<1500

1000~5000

1500~30000

3000~70000

4000~150000

5000~400000

5000~800000

<700

<1500

100~5000

500~10000

1000~50000

1000~100000

1000~150000

1000~200000

1.0±0.1

1.5±0.2

2.5±0.2

5.0±0.3

7.5~0.5

10±1.0

15±1.5

20±2.0

2~3

2.5~3.5

4~6

9~11

12~15

15~20

20~30

30~40

3

3

3

3

24

72

72

72

1

1

1

1

3

5

5

5

       葡聚糖凝胶在水、盐溶液、弱酸及弱酸溶液中稳定性较好,长期暴露在0.1mol/L的HCl或强氧化剂中将会破坏颗粒。微生物可使其降解,要注意防止发霉。
       葡聚糖凝胶还具有离子交换性质,这是由少数羧基引起的;并对芳香族化合物有吸附作用。
       2.聚丙酰胺凝胶    为化学上最惰性的凝胶,由丙烯酰胺与N,N'-亚甲基二丙烯酰胺交联聚合而成。又名生物胶-P(bio-P)。一般性质及应用均与葡聚糖凝胶相仿。
       3.琼脂糖凝胶    为乳糖的聚合体,不耐压。当分离物质的分子量超过500000时,选用琼脂糖凝胶较理想。
       4.多孔玻璃    有精确的孔径大小,机械性能好,耐高压,选择性好。
       上述几种凝胶适宜于分离水溶性样品。对于非水溶液样品的分离则采用聚苯乙烯凝胶(商品名为“Styragel”),可在有机溶剂中膨胀,质地坚硬,可应用在高压柱中。
       LH-20型葡聚糖凝胶是在G-25型凝胶上引入羟丙基基团,既具有亲水性,又有亲脂性,可以在多种有机溶剂中膨胀后应用。适用于分离黄酮、蒽醌、色素等有机物。
       各类凝胶的适用范围,可见表14-10。
表14-10  各类凝胶适用范围简表
类别 层析介质 分离范围(分子量)

葡聚糖凝胶(G)类

Sephadex G

葡聚糖醚凝胶

Sephadex LH-20

聚丙烯酰胺凝胶

Bio-Gel P

琼脂糖凝胶

Agarose gel

聚苯乙烯凝胶

Styragel


水或有机溶剂




有机溶剂

<700~800000(蛋白质)

<700~20000(多糖)

100~2000~10000


200~400000(蛋白质)


10000~1.5×10(8次方)(蛋白质病毒)


1600~40000000

 

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