银杏内酯 C

 

中文名称     银杏内酯 C

中文同名     白果苦内酯 C

英文名称     Ginkgolide C

化学式        C20H24O11

分子量        440.4

CAS编号    15291-76-6

质检信息

质检项目       指标值

含量,％         ≥98%

PSA：         169.05000

LOGP：      -2.39870

熔点 >330 °C(lit.) 

沸点 348.61°C (rough estimate) 

密度 1.2981 (rough estimate) 

折射率 1.4413 (estimate)

化学特性

银杏内酯 C为白色结晶体，易溶于甲醇，来源于银杏叶。

产品用途

银杏内酯C对治疗心、脑血管疾病有很好的辅助作用。医药中间体和化学研究。

储藏措施

1.储存于阴凉、通风的库房。

2.应与氧化剂、食用化学品分开存放，切忌混储。

3.保持容器密封。      

4.远离火种、热源，防止阳光直射。

5.库房必须安装避雷设备。

6.排风系统应设有导除静电的接地装置。

7.采用防爆型照明、通风设置。

8.禁止使用易产生火花的设备和工具。

9.储区应备有泄漏应急处理设备和合适的收容材料。

10.防止粉尘和气溶胶生成。

急救措施 

【食入】摄入不可能。但是，如果摄入，获得紧急医疗照顾。

【吸入】如果克服被曝光，将受害人转移到空气新鲜处。给予吸氧或人工呼吸。获得紧急医疗照顾。迅速采取行动是至关重要的。

【皮肤】立即脱去污染的衣着。彻底清洗皮肤，用温和的肥皂/水。W /温水冲洗15分钟。如果是粘的，首先使用无水清洁。寻求医疗照顾，如果不良影响或刺激。

【眼睛】眼睛接触的情况下，立即用清水冲洗20-30分钟。经常收回眼皮。获得紧急医疗照顾。银杏内酯组合物的医药用途的制作方法

肌萎缩性侧索硬化(amyotrophiclateralsclerosis，ALS)为肌肉萎缩症的一种。该疾病不影响人的心智，它主要导致肌肉衰弱和萎缩。发病晚期会导致舌肌萎缩、语音不清和吞咽困难以及全身性麻痹。该病发病年龄为30-50岁，1-5年后常因呼吸困难而导致死亡。通常说，异常磷酸化的神经丝在脊髓前角运动神经元聚集被认为可能是ALS的重要病理特征之一。神经丝属于细胞骨架蛋白，一般情况下，神经丝在神经元胞浆内以非磷酸化形式存在，而轴索内的神经丝以磷酸化形式存在，对维持轴索的直径等有重要作用。异常磷酸化的神经丝的可以抑制神经丝蛋白的降解，导致其在核周异常聚集，最终引起神经元变性、死亡。

最近，在肌萎缩侧索硬化患者的脑组织中发现了分子量约为43kDa的TARDNA结合蛋白(TDP-43)阳性包涵体。TDP-43是一种保守的，广泛表达的核蛋白，由1号染色体上TARDBP基因编码。病理状态下，TDP-43从细胞核向细胞质聚集，TDP-43功能与机理的发现丰富了我们关于ALS发病机制的理解。进一步的研究还发现，ALS患者是以胞质内聚集不溶性的、过度磷酸化的、泛素化的和蛋白水解裂开的C端片段在受累的脑和脊髓区域堆积为特征。尤其是25kDa的TDP-43蛋白C末端片段(TDP-25)在受累的脑区域聚集提示它可能涉及疾病的发病机制。研究表明，TDP-25过度表达足以引起TDP-43的错误定位和TDP-43在胞质内的异常积累。因此，科学家们建立了TDP-25的稳定转染细胞系，其可以稳定过表达TDP-25，在体外模拟肌萎缩侧索硬化症在细胞水平的病理变化，从而作为肌萎缩侧索硬化症研究的细胞模型。此外，有研究表明，表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对稳转TDP-25和TDP-43基因的NSC34细胞(鼠神经元细胞)活力具有显著的抑制作用。

在ALS动物模型方面，研究最多的是自然发病的动物模型，即：Wobbler大鼠模型。Wobbler大鼠之所以作为ALS的模型研究，是由于常染色体突变隐性遗传导致脊髓神经元退行性改变，这与ALS神经元受损和临床表现具有相似性。Wobbler大鼠表现为选择性的脊髓运动神经元受损，出现空泡样变性，肌肉出现失神经性萎缩，氨基酸和过氧化物的代谢异常，临床表现上累及动物的前肢肌肉，出现行走摇晃和前爪无力，渐到前爪瘫痪，电生理研究显示动物前肢失神经表现。Wobbler大鼠模型因其神经元变性的特点，适合于研究ALS疾病神经元变性的发病机制。

此外，多年来尽管有许多关于ALS疾病的药物研究，利鲁唑仍是惟一被FDA批准应用于治疗ALS的药物，但其也只能有限地延长病人的生存期。因此，关于ALS疾病的药物仍有待开发。近年来，中药抗肌萎缩侧索硬化症的研究逐渐引起人们的关注，而且由于很多中药组分属于天然提取药物，具有副作用小等优点。有鉴于此，本发明希望能从传统中药中寻找到ALS疾病治疗的新方案。

技术实现要素：

本发明以在两种模型上进行验证的方式对银杏内酯组合物进行研究，旨在得到一种具有治疗或预防肌萎缩性侧索硬化的银杏内酯组合物。

由此，本发明提出了银杏内酯组合物在制备治疗或预防肌萎缩性侧索硬化药物中的应用。其中，所述肌萎缩性侧索硬化包括肌肉衰弱和萎缩，或者舌肌萎缩、语音不清、吞咽困难以及全身性麻痹等。

具体地，该银杏内酯组合物包括银杏内酯A、B、K，其中，以重量比计，银杏内酯A：银杏内酯B：银杏内酯K＝(20～40)：(50～75):(0.2～5)。

进一步地，以重量比计，银杏内酯A：银杏内酯B：银杏内酯K＝(20～35)：(50～70):(0.5～4)。更进一步，以重量比计，银杏内酯A：银杏内酯B：银杏内酯K＝(20～30)：(50～65):(0.8

4)。

具体地，所述治疗或预防肌萎缩性侧索硬化药物中，银杏内酯组合物注射治疗有效量为0.2-0.8mg/kg/d。

本发明还提出了一种制备治疗或预防TDP-25蛋白过表达引起的神经细胞退行性疾病药物中的应用。其中，TDP-25蛋白过表达是指25kDa的TDP-43蛋白C末端片段在受累的脑区域聚集。受累的脑区域包括：层运动区，脑干运动神经元以及脊髓运动神经元。

具体地，银杏内酯组合物可以使用各种药学上可接受的辅料制备成口服给药剂型、注射给药剂型、外用给药制剂。

进一步地，银杏内酯组合物可以制备成胶囊剂、片剂、粉针剂、透皮剂等等。

本发明通过TDP-25的稳定转染细胞模型和Wobbler大鼠模型，证实了本发明提出的银杏内酯组合物对TDP-25蛋白具有抑制作用，且不同剂量银杏内酯组合物均能显著延缓Wobbler大鼠发病，延长存活期，该作用与临床上常用于缓解肌萎缩侧索硬化症的阳性对照药利鲁唑的药效相似。由此，两种模型均表明，银杏内酯组合物对肌萎缩性侧索硬化症均有较好的疗效。

具体实施方式为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的银杏内酯组合物在制备预防和/或治疗ALS药物中的应用进行详细描述，但不能将其理解为对本发明保护范围的限定。

需要注意的是，如未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用原料药或辅料，以及所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例或份数按重量计。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用与本发明。

银杏内酯类化合物对稳转TDP-25的NSC34细胞活力的抑制作用

1、实验材料

1.1药物及试剂

原料银杏内酯A(GA)、银杏内酯B(GB)、银杏内酯K(GK)以及银杏内酯组合物1-4由江苏康缘药业股份有限公司自制，具体如下；

鼠神经元细胞(NSC34细胞)，购于美国ATCC细胞库。pCI-neo载体和TDP-25由上海生物工程技术有限公司合成并提供。转染试剂lipofectamine2000、转染培养基Opti-MEM以及筛选抗生素新霉素均购自于Invitrogen。

DMEM培养基，购自江苏凯基生物技术股份有限公司，批号：20151015，细胞生长液中含10％胎牛血清、1×105U/L青霉素、100mg/L链霉素。MTS细胞增殖定量检测试剂盒，购自Promega公司，批号00000657694。

1.2主要耗材与仪器

M2e型酶标仪，MolecularDevices；

移液器，eppendorf公司；

生物安全柜，购自HealForce公司，型号：HFsafe-1200；

二氧化碳培养箱，购自ThermoScientific公司，型号：FormaSteri-Cycle371。

2、实验方法

NSC34细胞在转染前一天，用胰酶消化后接种在6孔板内，待细胞汇合度达到80％左右时进行质粒转染。转染步骤如下，取2个无菌1.5ml离心管，分别加入250ul的Opti-MEM。将10ullipofectamine2000加入一个离心管内，轻轻混匀，室温孵育5min。将待转染的质粒3ug加入另一个离心管中，混匀；孵育结束后将两个离心管混合在一起，室温孵育20min；将待转染的细胞换成opti-MEM培养基。孵育结束后将混合好的体系均匀加入待转染的细胞中。转染6h后换为含有新霉素的筛选培养基。每2天换液一次，待在显微镜下见到明显的单克隆时即可挑选出来进行Western-blotting鉴定并进行实验。

转染TDP-25基因的NSC34细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养基按1×105个/ml浓度接种96孔培养板，每孔100μL。用无血清DMEM培养基将银杏内酯类组合物配制成不同浓度分别处理细胞，设3个复孔，同时设置正常组(不加药)和阳性对照组EGCG。NSC34细胞于37℃、5％CO2培养箱中培养48h。加入100μLPBS溶液洗涤96孔2次，加入用无血清DMEM培养基稀释10倍的MTS试剂，每孔100μL，37℃、5％CO2培养箱中孵育2h，酶标仪490nm测定吸光度(A)。计算细胞生存率＝100％×[A(正常组)-A(样品组)]/A(正常组)，并计算各银杏内酯类组合物对NSC34细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)。

此外，为了区分药物对细胞的抑制作用源于药理作用或是毒性作用，关于银杏内酯类化合物对转染空pCI-neo载体的NSC34细胞的毒性作用(TC50)也作了相应研究。TC50和IC50采用统计分析软件SPSS19.0进行计算。实验结果如表1所示。

表1银杏内酯抑制转染TDP-25基因NSC34细胞活力

实验结果表明：银杏内酯组合物中，YXNZ-1有较强的抑制转染TDP-25基因NSC34细胞活力。效果优于其他银杏内酯组合物及阳性对照药EGCG。此外，银杏内酯组合物对转染TDP-25基因NSC34细胞无明显细胞毒性，而EGCG具有一定的细胞毒性。

银杏内酯类化合物组合使用对Wobbler大鼠的保护作用

1、实验动物

6～7周龄SPF级Wobbler大鼠(180～220g)，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于独立通风系统中(温度：22～27℃，湿度：40～50％，光暗周期：12h/12h)，喂以灭菌的SPF级颗粒型鼠类饲料及灭菌水。

编辑网站：https://www.999gou.cn    999化工商城

产品信息
[颜色]	白色
[重量]	20mg