L-5-甲基四氢叶酸钙

中文名称     L-5-甲基四氢叶酸钙

中文同名     L-甲基叶酸盐

英文名称     Levomefolate calcium

化学式        C20H23CaN7O6

分子量        497.52

CAS编号    151533-22-1

质检信息

质检项目       指标值

含量,％         ≥95%

灼烧残渣(以硫酸盐计)，％≤ 0.1

PSA：        208.43000

LOGP：     -1.67900

熔点 >300 °C(lit.) 

沸点 209.98°C (rough estimate) 

密度 1.86 

折射率 1.8010 (estimate)

化学特性

L-5-甲基四氢叶酸钙为白色粉末，是L-5-甲基四氢叶酸的钙盐，属于叶酸族维生素(维生素B9，叶酸)，它是叶酸的一种辅酶形式。l-5-甲基四氢叶酸钙(5-mthf)，是叶酸自然产生的成盐甲基衍生物形式，5-mthf亦称为左旋甲基叶酸，它是叶酸最具生物活性和功能的形式，比普通叶酸更容易吸收。

产品用途

1.l-5-甲基四氢叶酸钙(5-mthf)，是叶酸自然产生的成盐甲基衍生物形式，5-mthf亦称为左旋甲基叶酸 ，它是叶酸最具生物活性和功能的形式，比普通叶酸更容易吸收。

2.普通叶酸必须转换为l型甲基叶酸才能参与的两个主要代谢途径：甲基化过程及dna合成，通常出现在人体血浆和细胞内的游离叶酸存在的唯一形式是5 - mthf。

3.缺乏叶酸通常是由于维生素缺乏导致吸收不足，在怀孕和哺乳，儿童成长期间加大叶酸的需要，在吸收或新陈代谢改变或药品影响下，食用叶酸丰富的食物不能保证提供的剂量，因此需要给与补充。

 

储藏措施

1.储存于阴凉、通风的库房。

2.应与氧化剂、食用化学品分开存放，切忌混储。

3.保持容器密封。      

4.远离火种、热源，防止阳光直射。

5.库房必须安装避雷设备。

6.排风系统应设有导除静电的接地装置。

7.采用防爆型照明、通风设置。

8.禁止使用易产生火花的设备和工具。

9.储区应备有泄漏应急处理设备和合适的收容材料。

10.防止粉尘和气溶胶生成。

急救措施 

【食入】摄入不可能。但是，如果摄入，获得紧急医疗照顾。

【吸入】如果克服被曝光，将受害人转移到空气新鲜处。给予吸氧或人工呼吸。获得紧急医疗照顾。迅速采取行动是至关重要的。

【皮肤】立即脱去污染的衣着。彻底清洗皮肤，用温和的肥皂/水。W /温水冲洗15分钟。如果是粘的，首先使用无水清洁。寻求医疗照顾，如果不良影响或刺激。

【眼睛】眼睛接触的情况下，立即用清水冲洗20-30分钟。经常收回眼皮。获得紧急医疗照顾。

L-5-甲基四氢叶酸与有机碱加成盐的方法

【专利摘要】本发明公开了一种用L-甲基四氢叶酸与有机碱加成盐的方法。在氮气流下，将L-甲基四氢叶酸钙悬浮在乙醇中，另取溶于水的有机碱的盐酸盐或硫酸盐或游离碱，慢慢加到L-甲基四氢叶酸钙乙醇悬浮液中；将上述混合物充分搅拌，保持0-20℃，继续搅拌2小时，滴加丙酮，静置24小时；过滤，用冷乙醇/水洗涤，25-40℃真空干燥。

【专利说明】L-5-甲基四氢叶酸与有机碱加成盐的方法

【技术领域】

[0001]本发明涉及有机化学领域，具体而言涉及到有机药物L-5-甲基四氢叶酸与有机碱加成盐的方法。

【背景技术】

[0002]L-5-甲基四氢叶酸的化学名称为N-(5-甲基)-6(S)_5，6，7，8，-四氢蝶酰基-L-谷氨酸，简称L-5-MTHF或(6S)-5-MTHF。L-5-甲基四氢叶酸是组织和血液叶酸的主要形式，参与体内多种重要的生化反应(如嘌呤和胸腺嘧啶的生物合成等)。天然存在的5-MTHF仅为L-型，而其化学合成的光学异构体D-型无生物活性的，通过肾脏排出体外；L-5-MTHF在人体内不需要经过繁琐的酶促代谢步骤，可以直接被利用。(张越等，精细和化学品，13，(22)，13，2005)。

[0003]较先，L-5-MTHF作为药物具有两个方面的重要作用:在肿瘤学治疗上，联合用甲氨蝶呤(Methotrexate)和5_氟尿卩密唳(5-Fluorouracil)治疗肿瘤；治疗由叶酸引起的贫血。最近的研究表明:L-5-MTHF是叶酸类药物中唯一可以透过血脑屏障，具有防治阿尔茨海默(老年痴呆症)的作用的药物。化学合成的L-5-MTHF是主要药物活性成份和食品添加剂，有预防胎儿神经管缺陷，动脉硬化，治疗巨幼细胞贫血等作用。

[0004]一般而言，要从人体或动物组织和血液中提取，分离和纯化L-5-MTHF是有难度的，且成本昂贵。而应用合成方法是由叶酸进行氢化和甲基化反应而制备得到^R，S)外消旋体(U.S 5，124，452)。

[0005]而Klaus.S等提出了以有机碱N-乙基-2-氨甲基吡咯烷或它的对映体为拆分剂为特征的从外消旋体^R，S)-5-甲基四氢叶酸制备^S)-5-甲基四氢叶酸及其钙盐的方法(U.S 5，457，202)，也有用1_苯乙胺或它的对映体为拆分剂，继而成钙盐L-5-MTHF-Ca(W02008031284).[0006]L-5-MTHF-Ca 已为美国 FDA 确认是一般安全物质 GRAS (Generally Recognized asSafe, Chemical and Technical Assessment 65th, JECFA),作为食品添加剂和营养保健品主要成分。

[0007]随着钙的强化食品越来越普遍，钙补充剂的种类越来越多，钙过量的不利影响也逐渐增加起来。摄入过量钙可能产生的不良作用主要有三个方面:①增加肾结石的危险性。②奶碱综合症。典型症状包括高钙血症、碱中毒和肾功能障碍，其严重程度取决于钙和碱摄入量多少和持续时间。③钙和其他矿物质的相互干扰作用。钙和铁、锌、镁、磷等元素存在相互作用，高钙摄入会影响这些矿物质的生物利用率。

[0008]Gnosis S.p.a.提出L_5_甲基四氢叶酸葡氨盐和L_5_甲基四氢叶酸半乳糖氨盐制备方法和用途(US 7，947，662). 该方法制备过程中，要先分别制备(游离酸)L-5-甲基四氢叶酸和(游离碱)氨基葡萄糖(D-Glucosamine)或半乳糖(D-Galactosamine),以水为溶剂进行加成，收率低，稳定性差，而且需要专用设备冷冻干燥或喷雾干燥器。

【发明内容】

[0009]本发明目的是提供一种L-5-甲基四氢叶酸与有机碱加成盐的方法。本发明克服现有L-5-甲基四氢叶酸葡氨盐工艺过程中存在的缺陷和不足之处，提出了以市场易购得的L-5-甲基四氢叶酸钙和有机碱盐氨基葡萄糖盐酸或氨基葡萄糖硫酸直接加成L-5-甲基四氢叶酸的有机胺盐。

[0010]我们惊奇地发现在乙醇/水环境中，在过程中充分搅拌，甲基四氢叶酸钙(MTHF-Ca)，氨基葡萄糖盐酸(GS-HCl)分别可以离子化:

[0011]

【权利要求】

1.一种用L-甲基四氢叶酸与有机碱加成盐的方法。具体制备步骤如下:1.在氮气流下，将L-甲基四氢叶酸钙悬浮在乙醇中，另取溶于水的有机碱的盐酸盐或硫酸盐或游离碱，保持0-20°C，慢慢加到L-甲基四氢叶酸钙乙醇悬浮液中；

2.将上述混合物(L-甲基四氢叶酸钙:有机碱=Imol: lmol，或L-甲基四氢叶酸钙:有机碱=lmol: 2mol)在室温下，充分搅拌8小时；

3.滴加适量丙酮搅拌6小时，静置24小时，过滤，用冷乙醇/水洗涤，25-40°C真空干燥。2.根据权利要求1，有机碱是氨基葡萄糖盐酸或氨基葡萄糖硫酸，也包括葡萄糖甲胺或半乳糖胺。3.根据权利要求1，其制备方法包括使L-甲基四氢叶酸钙和有机碱在液体乙醇/水环境中离子化，充分搅拌是必要的。

4.根据权利要求1，其制备方法包括使L-甲基四氢叶酸钙和有机碱在液体丙酮/乙醇/水环境中结晶，先充分搅拌后`充分静置是必要的。

一种5-甲基四氢叶酸的纯化方法与流程

5-甲基四氢叶酸的化学名称为N-(5-甲基)-6(S)-5,6,7,8,-四氢蝶酰基-L-谷氨酸，简称(6S)-5-MTHF，结构式如下：

5-甲基四氢叶酸是叶酸最具生物活性和功能的形式，是叶酸参与生理代谢的唯一途径，也是出现在动物血浆和细胞游离叶酸存在的唯一形式。主要用于药物活性成分和食品添加剂，有预防胎儿神经管缺陷、动脉硬化，治疗巨幼红细胞性贫血，增强氟化嘧啶的治疗效果，治疗例如牛皮癣和风湿性关节炎的自身免疫疾病。孕激素和5-甲基四氢叶酸联合用药在治疗子宫内膜异位症并同时减轻治疗副作用以及降低怀孕期间的先天畸形的风险等方面的应用。

5-甲基四氢叶酸及其盐不稳定，特别对氧化高度敏感[见A.1.Fiitzhugh, 蝶啶(Pteridines) 4(4)，187-191(1993)]，因此很难制得足够纯的纯度以用作药物活性成分和食品添加剂。

为了克服5-甲基四氢叶酸不稳定的缺点，已经采取了许多方法，例如尽可能完全除氧或加入抗氧化剂如抗坏血酸，然而在实际过程中很难完全除氧，即使可以做到这一点，其成本也很昂贵。

美国专利US8314102提供了一种通过5-甲基四氢叶酸的钙盐纯化5-甲基四氢叶酸的方法，但得到的5-甲基四氢叶酸只有96.45%的纯度。中国专利CN103694239也提供了一种用苯磺酸水溶液纯化5-甲基四氢叶酸的方法，但该方法只是将5-甲基四氢叶酸的纯度从96.3%提高到99%以上，如需将纯度提高到99.7%，则需要重复结晶操作，因此该方法的纯化能力受到限制。

专利CN1154648C公开了在高于60℃的溶液中处理5-甲基四氢叶酸的钙盐，使钙盐从极性溶剂中结晶，获得了化学纯度＞98%的(6S)-5-甲基四氢叶酸钙盐晶体。但由于5-甲基四氢叶酸钙盐晶体的溶解性极差，如果5-甲基四氢叶酸钙盐制备5-甲基四氢叶酸，从所需的溶剂量非常大，制约了工业化生产的产能。

因此，找到一种商业上可行的方法来制备高纯度的5-甲基四氢叶酸及其盐是非常有必要的。

技术实现要素：

本发明的目的是针对现有技术的不足进行改进，提供一种更稳定、纯度高、重现性好的(6S)-5-甲基四氢叶酸的纯化方法，包含以下步骤：

1） 将5-甲基四氢叶酸与有机碱在溶剂中混合成盐；

2） 将步骤1）中得到的混合物冷却降温，使盐结晶析出，分离，得到5-甲基四氢叶酸与有机碱的盐。

3） 将步骤2）中所得到的5-甲基四氢叶酸与有机碱的盐溶于碱的水溶液中，加入适量的酸，使5-甲基四氢叶酸游离析出，分离，得到高纯度的5-甲基四氢叶酸。

进一步，步骤1）中所述有机碱选自C1~C20的一级胺或二级胺。

再进一步，所述的有机碱选自苄胺、α-苯乙胺、左旋苯乙胺、右旋苯乙胺、L-苯甘氨醇、D-苯甘氨醇、L-苯丙氨醇、D-苯丙氨醇、1-萘乙胺、R-1-萘乙胺、S-1-萘乙胺、二乙胺。

又，步骤1）中所述溶剂选自水、可与水混溶的有机溶剂以及它们的混合物。所述可与水混溶的有机溶剂选自C1~C6的醇类、酮类、酰胺类、腈类、亚砜和砜。

步骤1）中所述5-甲基四氢叶酸与有机碱的摩尔例为1:0.5~1:2.0，5-甲基四氢叶酸与溶剂的重量比为1:1~1:100，5-甲基四氢叶酸与有机碱在溶剂中混合的温度范围是0~100℃，

步骤2）中所述混合物的降温范围是-20~40℃。

步骤3）中所述的碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾和氢氧化锂，步骤3）中所述的酸为质子酸。

使用本发明的技术，将5-甲基四氢叶酸与合适的有机碱成盐，在溶剂中重结晶，能够得到高纯度的5-甲基四氢叶酸与有机碱的盐，将此盐进行游离，即可得到高纯度5-甲基四氢叶酸。使用本发明提供的纯化方法，通过一次结晶，就可将5-甲基四氢叶酸的纯度从88%左右提高到99.5%以上，并且5-甲基四氢叶酸与有机碱所成的盐溶解性相比5-甲基四氢叶酸钙盐更好，所需溶剂量大大减少，产生的废液的量也大大减少，不但提高了产能，同时也更加绿色环保。因此，该方法操作简便，重现性好，绿色环保，更加适合于工业化生产。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围不受以下实施例的限制。

在实施例中5-甲基四氢叶酸的含量均用HPLC进行检测，并给出面积百分数。

液相条件：

色谱柱：Hypersil-ODS，5μm，250×4.6mm （Thermo Hypersil Keystone or equivalent）

流动相A：溶解7.80g 0.05mol NaH2PO4·2H2O溶于1000ml水中，使用32%氢氧化钠调节pH至6.5，过滤，脱气

流动相B：溶解5.07g 0.03mol NaH2PO4·2H2O溶于350ml甲醇中，使用32%氢氧化钠调节pH至8.0，过滤，脱气

Time：0-14min流动相A：流动相B（体积比）=100-45:0-55；14-17min流动相A：流动相B（体积比）=45-0:55-100；17-24min流动相A：流动相B（体积比）=0:100；24.01-33min流动相A：流动相B（体积比）=100:0

进样量：10μl

流速：1.1ml/min

柱温：32℃

检测波长：280nm。

实施例1

将5-甲基四氢叶酸粗品（4.6克，纯度88.5%）和α-苯乙胺（1.2克）加入水（92毫升）中，80℃搅拌均匀。将上述溶液降温至30℃，过滤得到浅棕色固体4.5克，即为5-甲基四氢叶酸的α-苯乙胺盐，将此盐加入到10%的氢氧化钠水溶液（30毫升）中，搅拌溶清，加入试剂盐酸（8毫升），搅拌析出固体，分离，得5-甲基四氢叶酸3.4克，HPLC检测纯度99.5%。

产品信息
[颜色]	白色
[重量]	1g