制备色谱法
抖化学 / 2022-11-21
制备色谱法目的 表明具有高样品载荷容量的微粒硅胶可用于半制备规模的液相色谱分离。
设备 两个恒流泵或 恒压泵; UV检测器; RI检测器(使用: Waters Associates ALC/GPC244 型液相色谱仪，包括有两个M6000A型溶剂供输系统和M660程序器; Waters Associ-ates 440型UV检测器( 254纤米)，Waters Associates 示差折光计)。
柱系统 三根300毫米×4毫米内径柱，填充以10微米Pora-sil。
注样系统 样品环管进样阀和注射器柱头进样型式。使用Waters Associates U6K型无隔片注样器。
流动相 (1)氯仿;(2)异辛烷。
样品 四种增塑剂，即酞酸二甲酯、二乙酯、二正丁酯、二正辛酯。
辅助设备 样品收集器。
操作步骤 四种增塑剂分离的最佳化，是使用低的样品载荷量(<0.1亳克)，以分析规模得到最大的基线分辨率。这一分离是由“溶剂探索”技术完成的，使用了两套M6000A溶剂供输系统和溶剂程序器;其中一个泵供输氯仿，另一个泵供输异辛烷。对于所用柱系统的最佳溶剂组成是，20% 氯仿和180%异辛烷( V/V )。
对于制备操作，这一溶剂组成先在外部配制，然后用一个泵注人柱系统。柱的流出液由两个串联的检测器( UV和RI检测器)进行监控。连续增加注入的增塑剂样品量，直到样品载荷限度。对于所用的系统，这一样品量约为四种组分共35毫克;超过这一水平，样品就重叠，样品在流动相中的溶解度和在柱上的超载都起到限制作用。收集的样品级分再行展开，以观察所收集各峰的纯度。
结果 图13-50表示所达到 的分析分离。参看下一个实验中样品量对于分离的影响。对收集的样品进行分析，表明其纯度至少为99%。
结论 这一实验表明， 将几根分析柱串联，可以顺利地进行半制备规模的分离和收集。对于分析分离只需一根柱即已够用，而将这些柱串联起来，应用常规分析技术进行二到三次操作，就可收集到足够的纯样品。
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