分光光度比色法测定高锰酸钾
实验室k / 2019-07-19
一、目的
1.熟悉72型或721型分光光度计的使用方法。
2.熟悉吸收光谱曲线的绘制方法，能从吸收光谱曲线中选择最大吸收波长(λ最大)。
3.掌握分光光度计比色法的操作和测定有色物质含量的方法。
二、高锰酸钾的比色原理
高锰酸钾的水溶液中的MnO4-本身是紫红色。当每毫升KMnO4溶液中含有1微克高锰酸钾时，溶液也能呈现显著的紫红色，因此高锰酸钾可以直接通过比色来测定其含量。
三、操作步骤
1.标准溶液的配制 准确称取基准物KMnO4 0.1250克，在小烧杯中溶解后全部移入1000毫升容量瓶中，用蒸馏水稀释至标线，摇匀，每毫升含KMnO4为0.125毫克。
2.比色测定(用72或721分光光度计)
(1)吸收曲线的绘制(测定λ最大值)精密吸取上述KMnO4标准液20毫升于50毫升容量瓶中，加蒸馏水至刻线，摇匀。以蒸馏水为空白，依次选择450、460、480、500、520、525(此处多选几个点)、550……700nm波长下测其吸收度(仪器操作见下述之四)。即每次选定某一波长后，先以蒸馏水为空白调节T＝100％后，再将稀释后的KMnO4比色液推入光路测其A值；然后再换某一波长后同上操作；在波长为520～530nm处附近要多选几个波长进行测定，以波长为横坐标，以吸收度为纵坐标，绘制吸收曲线。从吸收峰处找出最大吸收波长λ最大。
(2)标准(工作)曲线的绘制 取6支25毫升比色管，分别加入KMnO4标准液体积为0.00、1.00，2.00、3.00、4.00及5.00毫升，用蒸馏水稀释至刻线、摇匀。以第一管蒸馏水为空白，依次将系列比色液在测得的最大吸收波长处测其吸收度A值，然后以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线。标准系列比色液浓度依次为每毫升含KMnO4 0.0、5.0、10.0、15.0、20.0及25.0微克。
(3)样品的测定 与上述系列标准液同时配制。用1支25毫升比色管，加样品液5毫升(约含KMnO4 0.5毫克)，用蒸馏水稀释至刻线，摇匀。在与绘制标准曲线相同的测定条件下测其吸收度A值，做好记录并反复实验，从两次相近测得值中求平均值，然后从标准曲线上查出与平均值相对应的KMnO4浓度即为样品比色液的浓度。
3.计算 样品液中KMnO4浓度＝标准曲线中查得的样品比色液浓度×样品液稀释倍数
四、仪器操作
1.72型分光光度计的操作
(1)检查各接线等是否正确。
(2)将稳压器与检流计接上交流220伏电源。
(3)打开检流计电源开关后见到标尺上有光点，用零点调节器将光点标线调至透光度“0”位上。
(4)打开稳压器电源的开关和单色光器的电源开关，光路闸门拨到“红”点上，再以顺时针方向调节光亮调节器，使标尺上光点指100％附近，待10分钟后，光电池的光电流稳定后再使用仪器。
(5)空白溶液与比色液依次放入从暗室取出的比色杯架上，第一杯放空白溶液。要将比色杯放置正位，小心放入暗室内，把拉杆推向最里边，此时空白溶液应正在光路上，盖好暗室盖。
(6)转动波长调节器，从450nm开始对准红线
(7)再检查并调节零点，即光路闸门拨至“黑”点，光点应指标尺的“0”位；拨至“红”点，光点如不在T＝100％上时，则需轻轻转动光量调节器，使光点准确指T＝100％上。反复几次，检查合格后进行比色。
(8)将比色杯拉杆轻轻拉出一格，第二杯的KMnO4液进入光路，此时标尺上的读数即为KMnO4溶液的吸收度值，记录读数。
(9)将光路闸门关至“黑”点处，将拉杆再推至最里面，使空白溶液在光路上。
(10)依次转动波长调节器至460、480、500……600、700nm，在吸收峰附近可间隔每次2～4nm测定。再重复(7)(8)(9)三项操作，分别测定各吸收度。做出记录。
(11)测定完毕，切断所有电源，使光亮调节关至最小，取出并洗净比色杯放入盒中，将仪器罩好。绘制吸收曲线，找出λ最大，在该波长的光线下进行KMnO4样品液含量的测定。
2.721型分光光度计的操作
(1)检查各旋钮拨至起始位置；指针应指在标尺的T＝0处，否则应用标尺上面的校正螺丝进行节。电源插头接在交流220伏插座上。
(2)打开右端电源开关并打开比色杯暗室盖，此时光路自动关闭。
(3)转动标有“λ”的波长选择钮至所需之波长处。
(4)将有五挡的灵做度钮转至“1”挡上。
(5)调节标有“0”的零点调节钮使指针指示T＝0处。
(6)同前述将各比色杯放入比色架内正位处，使空白杯对准光路。
(7)关闭暗室盖，光路闸门自动打开。谓节标有“100°的调节钮使指针指示T＝100％处。然后开始预热约20分钟至指针指示稳定。
(8)20分钟后，按上法反复检查调节T＝0及T＝100％。
(9)拉出比色杯拉杆一格使比色液进入光路，记录该比色液吸收度值。将拉杆推进。
(10)当选择另一波长时，同上从(7)(8)(9)操作，测定该波长下比色液的吸收度值。
如在同一λ最大下测定一系列标准液或样品液时，则只需将各比色杯中待测液逐一拉出进行测定即可。
(11)测定完毕，关闭电源，拔下插头，复各钮至最初位置，洗净比色杯放入盒中，仪器用罩罩好。
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