国产72型分光光度计的基本工作原理与上述单光电池光电比色计相似,但分光光度计的单色光器比滤光片所选择的波长范围小的多,可以认为近似单色光;其次加设了稳定电压的专门装置;微电流检流计也比较精密一些,且单独另设一个装置系统。为携带、运输方便,72型分光光度计制作成三个组成部分。
图7-28是72型分光光度计的光学系统工作原理示意图。
从光源1发出白光,经过光狭缝2射到反射镜3,反射到聚光透镜4后,成为平行光射入棱镜5。经棱镜折射色散后,各种波长的单色光排列成光谱的形状射在镀铝的反射镜6上,反射镜可以转动选择某种所需波长的单色光反射到聚光透镜7上(与反射镜装在一个控制盘上)。从透镜7射出的光是单色的平行光,经过出光狭缝8射到盛有色溶液的比色槽9。没被溶液吸收的透过光,经光亮调节器10射到硒光电池11上,光电池产生的光电流产生磁场带动镜式检流计映出光亮点射在检流计的标尺上。读取数据,进行计算求出溶液中所含物质的量。
为叙述方便,参看(图7-29)72型分光光度的外形示意图加以说明。
(1)按接线要求将稳压器和微电流计接在单色器上。注意微电流计和单色器相接时,三股接线颜色是:红色接“+”,绿色接“-”,黄(或黑)色接。单色器要接在稳压器的输出接线柱上。
(2)电源电压与仪器电压相符时,插上电源。
(3)把单色光器的光路闸门扳到黑点(光路关闭指示)位置后,再将微电流计上的电源开关扳到开处。此时指示光亮点即出现在检流计标尺上。用0点调节器将光亮点准确地调至透光率标尺的0刻度上。
(4)打开稳压器的电源开关和单色器的光源开关,把光路闸门扳到红点(光路打开指示)上,再以顺时针方向调光亮调节器至光门适当开启,使微电流计上光亮点达到标尺上限附近。停10分钟后,待光电池趋于稳定后再开始操作。
(5)将单色光器上的光路闸门再扳回黑点处,重新校正微电流计的指示光亮点于0位上,立即开启光路闸门。
(6)将比色槽暗厢盖打开,取出比色槽架,将四只比色槽中的一只装入蒸馏水或空白溶液,其余三只装被测样品溶液。将比色槽置于架上,空自溶液槽放在第一格上,放回暗厢内,加盖盖好。先将空白溶液槽推入光路。
(7)用波长调节器选好所需波长对准红线。将光亮调节器以顺时针或逆时针方向轻轻转动,使光亮点中线准确地对准透光率100的刻度上。
(8)以上调节好后,可以进行样品溶液的比色测定。将比色槽的定位装置拉杆轻轻拉出一格,使第二个比色槽内的待测溶液进入光路。此时,微电流计标尺上光亮点所指示的读数即为该溶液的光密度或透光率。依此测定第二、第三个待测溶液,并读出数据。
(9)仪器在使用过程中,应经常关闭光路闸门来核对微电流计的0点位置是否有改变。如有改变,及时用0点调节器纠正。
注意某一测定溶液所需的波长往往有一个范围,即有几个波长均可作该溶液的吸收光带,这时一般选用吸收度最大的波长。
所制成的溶液浓度应尽量使光密度值在0.1~0.6的范围以内进行测定。这样所测得的读数误差较小。如光密度在0.1~0.6范围外,可调节溶液浓度,稀释或加浓,或者改选择适当波长的单色光。