还原糖用三苯基四唑化氯的試验法
还原糖和三苯基四唑化氯的无色碱性溶液共热,将有三苯基甲䐶沉淀出来:
这个反应曾作为糖类的一个极端灵敏試驗法的基础。这法与还原糖的大多数其它試驗法不同,醛类对它沒有干扰。此外,其它还原剂,如肼、胲、亚硫酸盐、酒石酸、柠檬酸等,对这个試剂都完全沒有活性。抗坏血酸,根据其化学結构可視同还原糖,也会发生同样的反应。
操作手续 試液一滴与0.5%三苯基四唑化氯的水溶液两滴及0.5N氢氧化钠一滴在微量试管或微量坩埚内混和。混合物煮沸1-2分钟,视还原糖的含量,有紅色或沉淀出現。
鉴定限度:0.2微克 葡萄糖、果糖、乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、抗坏血酸。
还原糖的試驗法
几乎一切还原糖的常量試驗法都可用于点滴試驗。这些試驗法(間-苯二胺法除外)都有赖于还原性质,因而其它还原性的物质必不可存在。
許多还原糖試驗法的鉴定限度(液滴的体积为0.04毫升)列于表33。
表33 还原糖类
试剂 | 颜色变化 | 鉴定限度/微克 |
納蓝德氏(Nylander's)溶液(含酒石酸盐的碱性铋溶液) | 变黑 | 10 |
AgNO3的氨溶液 | 变黑 | 0.1 |
次碘酸镁〔Mg(OH)2与KI3〕 | 褪色 | 5 |
0.001%碱性亚甲蓝的碱性溶液 | 褪色 | 1 |
1,3,4-二硝基乙酰替苯胺的碱性溶液 | 紫色 | 2 |
盐酸-间-苯二胺(用试液一滴蒸发) | 黄-绿色萤光 | 0.5 |
通过氧化銀的还原来检定还原糖的方法,也可作为灵敏的斑点反应在紙上来进行。滤紙条浸渗于0.2N硝酸銀溶液,并使干燥。将碱性试液的单滴,及大致同样浓度氢氧化钠溶液的单滴,各别彼此挨着置于紙上,就有两个氧化銀的棕色斑点現出。約1分钟后,将紙放入氨水中,其未变化的氧化銀在数分钟内完全溶解,而细小分散的不溶解銀的黑色斑点,則遺留在由含还原糖試样所产生的斑点上。
鉴定限度:0.1微克 葡萄糖
这个試驗法不能应用于有含CS或SH基团有机化合物存在的場合。在規定的条件下,这些化合物会形成黑色的Ag2S,同样不溶于氨。
己酮醣用氯化亚錫、硫酸及脲的試验法
己酮醣和含氯化亚锡的脲在硫酸中的溶液共热时,形成藍色。己醛醣和这試剂仅在延长加热后才发生紅色。这个反应的化学原理尚未明了。
操作手续 取糖溶液一滴,置微量坩埚中,用試剂溶液6至20滴处理,并在微焰上加热一分钟,然后让其冷却。如有己酮醣存在出現蓝色。己醛醣存在所給出的红色,仅在煮沸较久后出現,且其强度较差。
試剂溶液:脲4克及SnCl2 0.2克和40%硫酸10毫升,加热溶解。
下列的物量,可被检出:
8微克 左旋糖(蓝色) | 20微克 糊精(红色) |
15微克 蔗糖(蓝色) | 20微克 淀粉(红色) |
20微克 葡萄糖(红色) |
碳水化合物因脱水成糠醛的試验法
碳水化合物(二糖类及多糖类)和强无机酸或和草酸共同加热水解而形成单糖类:
(C6H10O5)x+XH2O → XC6H12O6
继续加热,单糖类(戊糖类)部分脫水而成为糠醛或类似的醛类,如用己糖时,則成为羟甲基糠醛:
这些醛类能随水蒸汽揮发,并能和苯胺形成紫色产物。
为使碳水化合物水解及其所产生的单糖类脫水进行得很好,可用糖浆状磷酸共同加热。
操作手续 在一个微量坩堝中,置試样一撮或将試液一滴在該坩堝内蒸发使干。加入糖浆状磷酸一滴,再将坩堝盖以曾用醋酸苯胺溶液潤湿过的滤紙一小片,并用一表面皿压住。在坩堝底部用微焰小心加热30~60秒钟(慎防泼溅)。按照碳水化合物的存在量,将有粉红至紅色出現。
试剂:10%苯胺在10%醋酸中的溶液。
下列各物量可被检出:
2.5微克 葡萄糖 | 2.5微克 蔗糖 |
2.5微克 左旋糖 | 2.5微克 乳糖 |
3.0微克 淀粉 | 2.5微克 山梨糖 |
2.5微克 半乳糖 | 2.5微克 麦芽糖 |
5.0微克 琼脂 | 2.5微克 阿拉伯糖 |
5微克乙基纤维素及甲基纤维素,乙酰纤维素及黄蓍树胶,都給出正反应。