埃尔利希氏重氮試驗法,在生物化学上广泛用以檢定具有生理重要性的物质,特别是苯酚衍生物与咪唑衍生物。这个試驗法可对能投入偶合反应的化合物,作为灵敏的初步試驗法。所用的試剂,为重氮苯磺酸(Ⅱ)的新配溶液,系用亚硝酸,于有盐酸同在时,将对-氨基苯磺酸(Ⅰ)进行重氮化所得:
化合物(Ⅱ)的无色溶液,立刻和酚类及芳族胺类偶合而产生酸性或碱性的偶氮染料:
如果这个酚或胺的对位已被占,偶合作用就会在OH-基团或NH2-基团的邻位上发生。同时必須加入碳酸鈉,使偶合作用能因而引起并使之完成。下列試験法,适合于快速檢定能与重氮化合物偶合的化合物。首先与此有关的,是酚类及芳族的伯、仲、叔胺类。
在咪唑衍生物方面,其与重氮化对-氨基苯磺酸的偶合,是在咪唑环的亚氨基α-位置上发生的:
对于組氨酸,式中R=CH2CH(NH2)COOH,对于組胺,式中R=CH2CH2(NH2)。
偶合作用,也可以在用某些其它含氮杂环,如胸腺碱(5-甲基尿嘧啶)、硫胺素(维生素B1等)时及用脂族伯硝基化合物时发生。
操作手续 試剂一滴,与0.5%碱金属亚硝酸盐溶液一滴,在滴試板的凹处一起混和,然后加入試液一滴,并进行攪拌。随又引入10%NaHCO3溶液一滴,如颜色立即产生,即为正反应。有些化合物可能产生較慢,等待1~2分钟不算太长;遇此情况,有必要作一空白试验。在检验醇溶液时,往往需要作空白比較试验。
试剂:0.5%对-氨基苯磺酸在2%盐酸中的溶液。
这个操作手续显示出:
0.2微克 苯酚 | 紅-黄色 | 5微克 苯胺 | 绿-黄色 |
0.8微克 間-苯二酚 | 紅-棕色 | 1.5微克 二甲替苯胺 | 紅-棕色 |
5微克 对-羟基联苯 | 棕色 | 2微克 二乙替苯胺 | 紅-棕色 |
2微克 α-萘酚 | 紅-棕色 | 0.1微克 間-羟基苯甲醛 | 棕-黄色 |
5微克 β-萘酚 | 黄色 | 50微克 对-羟基苯甲醛 | 橙-红色 |
1.5微克 酪氨酸 | 红色 |