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薄层色谱法(TLC)


实验室k / 2018-08-01

    薄层色谱法的技术,系使用一种涂在玻璃片上的吸附剂作为固定相,当流动相滤过吸附剂时,发生色谱的展开。薄层色谱法由于它的方便性和迅速性,它的清淅分离和它的高灵敏度,因而具有显著的优点并超过纸上色层法。下面介绍用薄层色谱法分离阳离子的实验手续。

    (一)色谱片的制备:
    薄层色谱法虽然用硅胶常比用其他物质多得多,它还有多种涂料可用。用硅胶作吸附剂,在其上分离阳离子并不永远成功,因为许多阳离子有相似的Rf值(见之前文章),并成组地留在吸附剂上。纤维素粉被推荐为用TLC分离阳离子的吸附剂,尽管分离比在硅胶上慢。纤维素粉的使用可认为是纸上色层法的代替,并且无机色谐法所得的数据一般适用于纤维素上的无机TLC。
    制备纤维素薄层,可铺上一种合用商品纤维素粉的水浆。最要紧的是,应用于薄层的玻璃片应当仔细洗净,这就是,玻璃片先放在
碳酸钠浓溶液中洗净,然后用蒸馏水仔细冲洗。
    纤维素粉水浆的制备是:在约90cm3蒸馏水中混合的15g纤维素粉并用一种机械混合器分散该粉约一分钟。用于无机TLC的纤维素粉是微结晶性质的。在分配色层法,使用非活化的层析片,因此,纤维素层不需要用加热活化。涂层的片可在室温过夜干燥。
    (二)试样的应用
    应用的试样溶液应当含有0.1到10mg的阳离子(每cm3),溶液可以是中性或微酸性。用一注射器或微移液管将1μl溶液加在色谱片的一端(片边约1.5-2.0cm)并使其在空气中干燥。干燥后立即开始展开。
    (三)色谱片的展开
    色谱常常是由上升技术展开的。将色谱片浸入展开溶剂(应当用再蒸馏或色谱级的溶剂)中约0.5cm的深度。展开溶剂置于能悬挂色谱片的密闭槽或箱中,使槽或箱中充满溶剂蒸气。由于毛细管的作用,展开溶剂通过试样点并不断上升,各溶质以不同的速度向前移动,直到需要的距离(通常为10-15cm)。然后从箱中取出色谱片,并立即用铅笔线标记溶剂前缘。分离的溶剂的位置能被各种方法确定。当观察固定相时,有色物质能直接看到;无色组分可用一相应的试剂喷酒色谱片而确定,该试剂在组分所占的区城产生带色面积。有些化合物在紫外线下发荧光并可用此法确定。此外,也可于吸附剂中掺合能在紫外线下发荧光的物质,当用紫外光观察时,溶质在萤光背景上显示暗斑,可据此进行测定(当用这种方法时,眼睛必须用特殊的保护物或眼镜保护)。
    (四)用显微镜载片的薄层色谱法
    阳离子的分离还可以方便地在涂以纤维素的显微镜载片(或将预涂纤维素的薄片切割为载片大小)上进行。将小点(直径约1mm)试样溶液引到色谱片上,在空气中千燥,然后将其放在小瓶中展开直到溶剂前缘行进2-3cm,分离可在5-10分钟内完成,分离的阳离子可用普通手续确定。
    (五)定量无机薄层色谱法
    在薄层片上被分离的组分,通常由测定斑点的光密度和面积来进行定量分析,也就是对色谱片进行光密度分析。进行这种手续时需要同已知量的标准混合物所得的斑点比较,它们必须在同样色谱片上用色谱法进行测定。
    还有一种改变的测定手续,就是从色谱片的适当部分翻下吸附剂以移去被分离了的组分。然后用适当的溶剂将待测组分从吸附剂洗出(萃取),并用合适的物理技术,例如紫外光分光光度法或荧光分光光度法进行测定。
    此法可用以分离镍、锰、钴和锌。

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