用四溴酚酞乙酯的試驗法
固体或溶解的四溴酚酞乙酯:
是黄色的,但其水溶的碱金屬盐却是藍色的。这些盐类可被稀醋酸分解,同时再生出酚。这个酯如和胶态的朊类接触,則会現出藍色。显然,这是由于形成似盐吸附化合物的缘故,这种化合物与碱金屬盐不同,是不会被稀醋酸分解的。这似与一种被称为指示剂的“朊誤差”(pH指示剂轉变范围的位移)的現象有关。这个效应很强烈地被四溴酚酞乙酯示出。尤其是它的稳定鉀盐,其藍色溶液可被稀醋酸轉成黃色(游离酯类的顔色)。但有朊存在藍色将持久保留。只有加入濃醋酸或无机酸才变成黄色。
这个反应对于天然朊类似具有特效性。朊的分裂产物如氨基酸类,二肽类及三肽类或腖类都无反应。
生物碱类如大量存在,也示出与天然朊类相似的性行,这可能是由于胶态分散生物碱和四溴酚酞乙酯形成吸附化合物的缘故,这些吸附化合物也耐醋酸。
操作手续 試液一滴与藍色試剂溶液一滴在一滴試板上混和,然后用0.2N醋酸1~2滴酸化。空白试验,将变成黄色,而含朊类試样的深蓝色仍保持不变。如仅有小量朊存在,其色带绿。
試剂:0.1%四溴酚酞乙酯鉀盐的酒精溶液。
下列各物可被检出:
0.5微克 蛋白朊 | 0.5微克 酪朊 | 0.5微克 鲑精朊 |
0.5微克 血紅朊 | 5微克 麻仁球朊 | 1微克 麸朊 |
0.35微克 血清白朊 | 0.5微克 鲱精朊 |
尿中病理增加的朊含量,可用这个反应,在一滴尿中作出检定。
水解分裂或热分裂成氨基化合物或亚氨基化合物后的試驗法
朊类被濃无机酸水解产生更簡单的分裂产物,如多肽类,氨基酸类等。由于色氨酸是几乎一切朊类的組份,它分解而产生吲哚及吲哚衍生物。这些氨基及亚氨基产物,可由和氯化萤光素熔化,或和对-二甲胺基苯(甲)醛縮合来作出檢定。后法中氨基可以产生有色希夫氏碱类。朊类因酸分裂所形成的吲哚碱类的縮合作用,显然在下列用对-二甲胺基苯(甲)醛的試驗法中,为一主要的反应。
操作手续 待試朊类的試样(固体或其溶液)在一微量坩埚中,与对-二甲胺基苯(甲)醛的飽和冰醋酸溶液数滴及发烟盐酸一滴混和。如有紫色出現,即示有朊类存在。
下列鉴定限度,曾經測出:
1微克 干腖 | 30微克 蛋白朊 |
20微克 血白朊 | 5微克 酪朊 |
100微克 皮粉 | 60微克 胰酶 |
10微克 麻仁球朊 | 胃朊酶,极不灵敏 |
甲状腺球朊示出正的白朊反应,但用純甲状腺素的反应則是負的。脑垂体制剂給出正反应。碳水化合物的混合物中,即使少至1%的白朊(例如麻仁球朊)也可清楚地作出檢定。
干热也可使朊类发生分裂。产生的吡咯及吡咯衍生物随燃燒产物一同揮发。如将它們与曾用5%对-二甲胺基苯(甲)醛的濃盐酸(或三氯醋酸)溶液浸渗过的滤紙接触,現出紫色。这个热分解过程可在微量坩堝中,或在微量試管中进行。鉴定限度为100微克左右的朊类。